アメリエフ株式会社

JAPAN

月別アーカイブ｜ 2023年3月

2023.03.31
RNA-seq Wet&Dry解析【新年度応援キャンペーン】

論文作成には欠かせない
データ解析まで込みの
スペシャルプライス

3.9万円/サンプル
（税込42,900円）
※6サンプル以上の場合

サービス内容

【RNAシーケンス】
○ ライブラリ調製
○ Illumina社 NovaSeq6000による（PolyA 4Gb/13.3Mペアエンドリード、non stranded RNA-seq）シーケンシング
※４Gbを超える場合や、strand specific RNA-seqをご希望の場合はお問合せください
【バイオインフォマティクス解析】
○ 解析レポート、最終報告（手法解説、結果解釈のディスカッション）
○ 発現定量解析：マッピング、 発現定量、階層的クラスタリング (ヒートマップ描画)、 主成分分析
○ 二群間の発現量比較解析：Volcano plot
※サンプル数によって対応可能な組み合わせ数が異なりますのでご相談ください
○ エンリッチメント解析：Gene Ontology解析、パスウェイ解析 (Reactome)

サンプル要件 / 注意事項

サンプルタイプ：total RNA

総量（ng） 液量（µL） 濃度（ng/µL） RIN値 純度
200以上 10以上 20以上 4.0以上
with flat base line 		OD260/280 = 1.8-2.2
OD260/230 ≥ 1.8
no degradation,
no contamination
  • ※ サンプルQCでRNA総量またはRIN値が非常に低い場合は、再提出をお願いすることがございます。
  • ※ シーケンシングはシンガポールにて実施します。
  • ※ 海外輸送費・ 納品にかかる費用 (クラウドまたはHDD) を別途頂戴します。
  • ※ ヒトおよびマウス、ラット以外の生物種をご希望の場合は、お問合せください。

ご利用の流れ

ご利用の流れ（WET＆DRY）

  • 研究目的、サンプル情報をヒアリングし、お見積りを作成します。
  • ご発注後、サンプルを準備いただき、シーケンスを行います。
  • 報告会にて、高次解析結果の報告および解釈について、ご報告します。

RNAseq解析とは

　RNAseq解析とは、次世代シーケンサー（NGS）を用いて転写物の塩基配列を決定する方法です。この配列をリファレンスゲノムへアライメントし、転写産物毎の発現量を測定し、通常はサンプル間の発現量の比較解析を行います。スプライスバリアント毎の発現解析、融合遺伝子検出、変異解析、新たな転写産物の予測を行うことができます。
　リファレンスゲノムのない生物の場合でも、配列をアセンブルして転写産物モデルを構築し、アライメントさせて解析することができます。

実験のポイント

　解析対象のRNAの種類に適したライブラリー調整キットを用いて、ライブラリー作成を行います。必要なシーケンス量は、生物種や何をプロファイリングしたいかによって異なります。ヒトやマウスの場合、最低でも2000万リード、4Gbp以上の測定が推奨されます。スプライスバリアント（アイソフォーム）の検出や新規転写産物を探索する場合、もしくはFFPEサンプルやnon-conding RNAを扱う場合には、シーケンス量を増やす必要があります。

解析のポイント

　NGSによるシーケンスで得られた配列は、FASTQというファイル形式で保存されます。この配列をスプライシングを考慮してゲノム配列にマッピングします。この結果は、BAM形式ファイルで保存され、IGV (Integrative Genomics Viewer)などのゲノムビューワーを用いて閲覧できます。
　発現量は、リードカウント、または、補正値を用います。FPKM (Fragments Per Kilobase of exon per Million mapped fragments)やTPM (Transcripts per million)は、発現量をエクソン長と全マッピング数で補正した値です。CPM (Counts per Million mapped reads)は、発現量を全マッピング数で補正した値です。
　2群間の比較解析では、発現量の比をlogスケールで表現した値、もしくはｔ検定による有意差P値がよく用いられます。

研究目的別高次解析のポイント

　臨床上の特徴や薬剤が遺伝子発現にどのような影響を及ぼすのかを、発現変動が観測された遺伝子に注目し、特定のパスウェイや生物学的な機能のまとまりで、その意味を捉えることが高次解析の目的です。
　このためには以下に示しますように、データの特徴を把握した上で2群間比較による発現変動遺伝子解析を行い、その上で研究目的に応じた生物学的な機能を理解するための解析手法を適切に選択することが重要となります。

データの特徴の把握

・主成分分析

主成分分析

　全サンプルを対象に、遺伝子発現の傾向を二次元プロットで表現します。これにより、二次元上にプロットされた各サンプル間の距離から、類似性を読み取ることができます。複数サンプルの発現プロファイルの類似度を視覚化し、その後の解析で群間の差を見出すことができるデータであることを確認します。 主成分分析

・階層的クラスタリングのヒートマップ

階層的クラスタリングのヒートマップ

　縦軸に遺伝子、横軸にサンプルを配置し、発現量を色で表現します。
　各軸でクラスタリングを実施し、群ごとに同じまたは近いクラスタに分類します。はずれ値を持つサンプルを確認できます。 		階層的クラスタリングのヒートマップ

2群間比較による発現変動遺伝子解析

　2群間で有意に発現量に差がある遺伝子群を特定します。

・Volcano plot

Volcano plot

　2群間の比較解析において、有意差P値（logスケール）と発現量の比（logスケール）を2次元プロットで表現します。各プロットの点は遺伝子に該当し、有意に変動している（p値や発現量比）遺伝子数の概観の確認や、変動の傾向の把握に使用します。
　各点に該当する遺伝子名を重ねて表記するなどし、既知の遺伝子で想定される発現変動が起きているかを確認するなど、データの妥当性の検討に用います。 		Volcano plot

発現変動遺伝子と生物学的意義

発現変動した遺伝子群の生物学的機能の共通点や、影響を受けているパスウェイ等の探索を行います

・GO(Gene Ontology)解析

GO解析

　Gene Ontologyとは、遺伝子の属性を説明する語彙を体系化・構造化した記述方法です。GOは生物学的プロセス、細胞の構成要素、分子機能の３カテゴリーに分けることができ、それぞれのカテゴリーにはさらなる下位概念が定義されています。有意に変動した遺伝子群がどのような生物学的概念にエンリッチしているかを解析することで、比較対象が影響を与えている生物学的機能を捉えます。
　最上位GOから、下位GOまでの繋がりを図に示します。それぞれのGOのエンリッチメント解析結果は色の濃淡で有意差（P値）の大きさを表します。 		GO解析
2023.03.31
シングルセルRNA-seq Wet&Dry解析【新年度応援キャンペーン】

論文作成には欠かせない
データ解析まで込みの
スペシャルプライス

103万円/サンプル
（税込1,133,000円）

サービス内容

【シングルセルRNAシーケンス】
○ 10x Genomics社 Chromiumによるライブラリー調製
○ Illumina社 NovaSeq6000による120Gbのシーケンシング
○ Cell Rangerによる発現定量
【バイオインフォマティクス解析】
○ 解析レポート、中間報告および最終報告（手法解説、結果解釈のディスカッション）
○ 研究の目的に応じて下記よりご提案
  ● 発現変動遺伝子の群間比較解析
    細胞クラスターごとの特徴遺伝子検討
サンプル間発現比較解析
GO解析（Gene Ontology）
パスウェイ解析
  ● 細胞分化に関わる発現変動遺伝子解析
    疑似系譜解析（Cell trajectoryの推定）

サンプル要件 / 注意事項

サンプルタイプ：細胞

  • 凍結状態であること。
  • 細胞数は106細胞以上であること。
  • 融解後の細胞の生存率が90%以上推奨。
  • 細胞は分散もしくは単離してください。
  • EDTA0.1mM以下、マグネシウム3mM以下、界面活性剤は含まないこと。
  • 細胞サイズが直径30μm以下であること。
  • 40μmのフィルターにかけてください。
  • 凍結の際にはセルバンカー等を用いてください。

 

  • ※ ヒトおよびマウス以外の生物種をご希望の場合は、お問合せください。
  • ※ 納品にかかる費用 (クラウドまたはHDD) を別途頂戴します。
  • ※ シングルセル遺伝子発現解析は、機器を持ち込んでの出張サービスも承っております。その際には出張費をご請求いたします。また、サンプルを持ち込んで頂いてのご利用も可能です。詳細はお問合せください。

ご利用の流れ

ご利用の流れ（WET＆DRY）

  • 研究目的、サンプル情報をヒアリングし、お見積りを作成します。
  • ご発注後、サンプルを準備いただき、シーケンスを行います。
  • 中間報告会にて、途中結果の報告および解析方針の確認、内容についてのディスカッションを行います。
  • 最終報告会にて、結果の報告および内容について、ご報告します。

シングルセルRNAseq解析とは

　シングルセルRNAseqとは、細胞の遺伝子発現プロファイルを一細胞レベルで取得して観測する画期的な技術です。これまでのRNAseq解析では、観測対象が細胞集団であり、細胞集団における各遺伝子の"平均的な"遺伝子発現を測定していました。一方、scRNAseqは細胞集団内の個々のトランスクリプトームを捉え、細胞特異的な変化を同定することが可能になります。Science誌において2018年のBreakthrough of the Yearとしても選出された技術であり、近年盛んに研究に用いられています。

実験のポイント

　シングルセルRNAseqでは、細胞の生存率が非常に重要です。
　死細胞が溶解すると周囲にRNAが遊離し、分析時のバックグラウンドノイズの一因となり、シングルセルデータの品質を著しく低下させるため、細胞の生存率を高める必要があります。一般的には生存率90%以上が推奨され、クリアな解析結果を得るためには、80%程度以上の生存率が必要です。
　またライブラリ調整に際しては、細胞数が106以上であること、細胞サイズが直径 30μm以下であること、細胞を分離させておくことなどの条件をクリアする必要があります。

解析のポイント

　特定の細胞種ごとの遺伝子発現プロファイルを確認します。まず、データのクオリティを確認した上で、細胞をクラスタリングし、各クラスターごとに遺伝子発現の状態を把握するための一連の解析を行います。

高次解析により得られる図表の例

バイオリンプロット、クラスタリング結果、Feature plot、UMAP

研究事例

１）がん組織の不均一性における薬物耐性の発生機序解明に関する研究

  • 　薬物耐性獲得のメカニズムの解明は、がんの薬物治療において不可欠な要素です。耐性獲得の背景は、様々あるとされていますが、がん組織の不均一性がその原因の一つであると考えられています。Kashimaらは、がん組織の不均一性における薬物耐性の発生機序解明にscRNAseq解析を利用しました(Kashima et al., Cancer Res, 2021)。
  • 　具体的には、オシメルチニブ耐性細胞の出現機構を解明するために、EGFR遺伝子に変異をもつヒト肺腺がん細胞株であるNCI-H1975細胞を用いて一細胞解析を行いました。H1975はオシメルチニブ感受性の細胞であることが知られていますが、この細胞を段階的にオシメルチニブに曝露し、各段階での細胞群をscRNAseq解析することで、①親株に少数のオシメルチニブ耐性細胞が存在すること、②オシメルチニブ曝露群にしか出現しない細胞群が存在すること、が明らかになりました。

２）発生/分化分野での毛包形成研究

  • 　全世界で男性の50％、女性の25％が薄毛に悩んでいると言われており、自己由来の幹細胞から毛包を誘導する研究が注目されています。しかし、生体内での毛包のde novo形態形成については、毛包の不均一性や非同期的な発達のため、アプローチが難しく理解が進まない状態でした。このような観点から、毛包のde novo形態形成の基礎となる分子経路を明らかにすることは、毛包の発生に関する深い洞察をもたらし、in vitro条件下での毛包の発生を誘導する上で重要な意味を持つと考えられます。
  • 　GeらはscRNAseq技術を用いて、様々な分化期におけるマウス背部皮膚から得られた細胞群に対して一細胞のトランスクリプトームを統合的に解析しました(Ge et al., Theranostics, 2020)。その結果、9つの主要な細胞集団の同定と、上皮/真皮細胞系の分化の軌跡を構築することに成功し、細胞の運命決定に関わる主要なレギュロンが順次活性化されていることを明らかにしました。
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2023.03.31
RNA-seq データ解析【新年度応援キャンペーン】
新年度応援キャンペーン「RNA-seqデータ解析」
[30%OFF]2.5万円/サンプル（税込27,500円）

データ解析内容

○ 解析レポート、最終報告（手法解説、結果解釈のディスカッション）
○ 発現定量解析：マッピング、 発現定量、階層的クラスタリング (ヒートマップ描画)、 主成分分析
○ 二群間における発現量比較解析：Volcano plot
※サンプル数によって対応可能な組み合わせ数が異なりますのでご相談ください
○ エンリッチメント解析：Gene Ontology解析、パスウェイ解析 (Reactome)

解析結果

受入れデータ・納品物

受入れデータ形式

  • FASTQファイル

納品物

  • 解析結果レポート（最終報告）
  • データ解析結果（PDF、Excelなど）
  • データ解析の中間ファイル
2023.03.31
シングルセルRNA-seq データ解析【新年度応援キャンペーン】
新年度応援キャンペーン「シングルセルRNA-seqデータ解析」
[15%OFF]21万円/サンプル（税込231,000円）

データ解析内容

【発現定量解析とサンプル間比較解析】
○ クオリティコントロール
○ 正規化、次元削減
○ データ統合
○ クラスタリングおよびUMAP上の可視化
○ クラスタごとの特徴遺伝子の探索
○ 各クラスタにおけるサンプル間発現比較解析
【エンリッチメント解析】
○ 着目遺伝子の発現量可視化（Feature plot, Violin plot）
○ GO（Gene Ontology）解析、パスウェイ解析
【擬似系譜解析】
○ Cell trajectoryの推定
○ Pseudotimeの推定
○ 着目遺伝子の発現パターン可視化

解析結果

受入れデータ・納品物

受入れデータ形式

  • 発現マトリクスファイル
    ※Cell Ranger で出力したファイルに限ります。その他のファイルの場合にはお問い合わせ下さい。
    ※FASTQファイル（Chromium, 10x Genomics）からの場合には別途費用をご請求いたします。

納品物

  • 解析結果レポート（最終報告）
  • データ解析結果（PDF、Excel）
  • データ解析の中間ファイル

 

解析結果レポート例

バイオマーカー探索を目的としたデータ解析を実施した場合の報告書例です。研究目的に応じたご報告を行います。

解析結果レポート例

2023.03.29
会員制動画配信サイト「バイオインフォマティクス実践ラボ」オープン

「バイオインフォマティクス実践ラボ」とは、アメリエフが提供する会員制動画配信サイトです。

バイオインフォマティクス実践ラボ会員 三大特典

オンデマンド動画を見放題 いつでも無料相談 イベント＆更新情報を随時お届け
オンデマンド動画を見放題 いつでも無料相談 イベント＆更新情報を随時お届け

特典１：オンデマンド動画を見放題

オンデマンド動画を見放題

アメリエフ主催イベントのオンデマンド動画を
「いつでも」「どこでも」完全無料ですべて見放題！
さらに、バイオインフォマティクスのトレンドに合わせ、最新の情報に更新、新しい解析技術を追加予定です。

特典２：いつでも無料相談

いつでも無料相談

イベント参加者限定でお申込みいただけた無料相談が、
バイオインフォマティクス実践ラボ会員なら、
いつでもお申込み可能に！
実際に解析を行っている技術者や、 人材育成の担当者との無料相談を通して、 課題の解決に繋がったという喜びの声をいただいております。

特典３：イベント＆更新情報を随時お届け

イベント＆更新情報を随時お届け

データ解析をこれからはじめよう、という方向けに
バイオインフォマティクスに関するイベント情報を随時お届け！
・勉強会：データが解析されていく様子をバイオインフォマティシャンの目線で体験
・WET&DRY：実験から解析まで一気にベストプラクティスを情報収集
・最新研究事例：第一線で活躍する研究者の発表をチェック

30秒で完了！バイオインフォマティクス実践ラボ 会員登録方法

①このページの「新規登録」ボタンをクリック

②「新規登録フォーム」でメールアドレス、パスワード、ご職業を入力して送信

③「ログインページ」にメールアドレス、パスワードを入力して利用開始！

2023.03.29
新年度応援キャンペーン｜トレーニング

　アメリエフでは、実践的なバイオインフォマティクス技術を習得するための豊富なトレーニング・サービスを提供しております。LinuxやPythonなどの基礎技術・言語から高次解析まで習得可能なオンライン・トレーニングはもちろん、事業化をサポートするコンサルティング、システム開発にも対応可能です。

2023.03.29
新年度応援キャンペーン「バイオインフォマティクストレーニング」事前学習併用型
新年度応援キャンペーン「バイオインフォマティクストレーニング」事前学習併用型

この春、新しい研究テーマに取り組むみなさまのバイオインフォマティクス技術習得を支援するため「新年度応援トレーニングキャンペーン」を実施いたします。
基礎技術を身に付ける基礎科目から、実践的な課題解決の技術習得を目的とした応用科目まで、全科目が対象となります。
さらに、みなさまの「トレーニングを受講したいが時間を確保できない」のお声に答えるため、新プラン「事前学習併用型」をリリースいたしました。この機会に是非ご活用ください。

対象期間 2023年6月30日までにご発注
キャンペーン割引対象 全科目15％オフ
実施形式 同時双方向型、事前学習併用型から選択
注意事項 訪問トレーニング、概論セミナーは対象外

事前学習併用型トレーニングの特徴と科目

事前学習＋ハンズオンで学習効果を最大化！

・バイオインフォマティクスの経験豊富な講師によるトレーニング動画を視聴（2週間）
・動画視聴期間はトレーニング用サーバを利用できるので自分のペースで実践的な学習が可能
・事前学習終了後に復習や疑問解消のためのWeb会議形式のハンズオントレーニングを開催

【事前学習併用型トレーニング対応科目】

【基礎科目】Linux入門、R入門
【応用科目】RNA-seq解析、シングルセルRNA解析

ご受講例

Linux入門：事前学習（動画視聴＋サーバ利用）3時間 ＋ ハンズオン（web会議）３時間
※上記は一例であり、受講者のスキルや受講科目によって学習時間は異なります

お客様の声

事前学習期間中に自分のペースで、理解度の浅いところなど重点的に学習できた。また、整備されたサーバ上でデータ解析を繰り返し実習でき、トライ＆エラーで理解度が上がってよかった。事前学習でつまづいた部分もあったが、ハンズオン質問会で解決できた。

大学臨床研究医

臨床研究医
平日の昼間は皆忙しく、突発的なオペがあったりと都合も合わせづらいので、バラバラの日程でも受講ができる事前学習併用型を選んだ。おかげで日曜、祝日、夜間など自分の都合の良い時間に学習できた。

大学臨床研究医

臨床研究医
ハンズオン質問会ではデータ解析の単純な解説にとどまらず、妥当なパラメータ設定やどういう場合に役立つツールかなど実践を想定した疑問について、専門の方から有益なことを教えてもらえたので大変良かった。

国立研究所研究員

国立研究所研究員

豊富な応用科目からご選択いただける「同時双方向型トレーニング」もご検討ください。
同時双方向型トレーニングのキャンペーン詳細はこちら

2023.03.29
新年度応援キャンペーン「バイオインフォマティクストレーニング」同時双方向型
新年度応援キャンペーン「バイオインフォマティクス・トレーニング」同時双方向型全科目15％OFF

この春、新しい研究テーマに取り組むみなさまのバイオインフォマティクス技術習得を支援するため「新年度応援トレーニングキャンペーン」を実施いたします。
基礎技術を身に付ける基礎科目から、実践的な課題解決の技術習得を目的とした応用科目まで、全科目が対象となります。

対象期間 2023年6月30日までにご発注
キャンペーン割引対象 全科目15％オフ
実施形式 同時双方向型、事前学習併用型から選択
注意事項 訪問トレーニング、概論セミナーは対象外

同時双方向型トレーニングの特徴

・同時双方向のWeb会議形式のハンズオントレーニング
・トレーニング用サーバを利用しながら講義内容を実践
・気軽に質問できる環境でつまずきを徹底サポート。基礎から実践まで一気にインプット

科目体系

おすすめの科目構成

  • シングルセルRNA-seqを始めたい
    基礎科目：R入門
    応用科目：シングルセルRNA-seq
  • 変異解析を始めたい
    基礎科目：Linux入門
    応用科目：Reseq解析
  • RNA-seqを始めたい
    基礎科目：Linux入門、R入門
    応用科目：RNA-seq
  • GWAS解析を始めたい
    基礎科目：Linux入門
    応用科目：SNPアレイデータのGWAS解析

お客様の声

普段からRを少し触っているが、しっかり学ぶ機会はこれまでなかった。基礎から丁寧に教えていただき、実際にRNA-seq解析を実行できた。また、初歩的な質問も気軽にできる雰囲気で良かった。

国立研究所研究員

国立研究所研究員
マンツーマンでトレーニングを受講し、書籍では得られない解析のノウハウを質疑応答で聞くことができた。

製薬企業研究員

製薬企業研究員

トレーニングを受講したいが平日に時間を確保できない方は、新プラン「事前学習併用型トレーニング」をご検討ください。
事前学習併用型トレーニングのキャンペーン詳細はこちら

2023.03.10
第82回バイオインフォマティクス勉強会「Jupyterで始めるRNA-seq解析の自動化」

　アメリエフは創業当時より「バイオインフォマティクスの活用を促進し研究を加速させる」ミッションを掲げ、定期的にバイオインフォマティクス勉強会を開催しています。
バイオインフォマティクス勉強会は、データが解析されていく様子をバイオインフォマティシャンの目線で体験できるイベントです。 初学者のデータ解析に対する敷居を下げる工夫をしておりますので、エッセンスをお持ち帰りいただきお役立ていただけましたら幸いです。 今回は「Jupyterで始めるRNA-seq解析の自動化」をテーマに開催いたします。

▼オンデマンド動画を視聴する▼

ラボで始めるRNA-seq解析環境構築動画
【講義内容】
　次世代シーケンサを用いたRNA解析は多くの研究で行われており、さまざまな解析ソフトウェアが公開されていますが、「論文のmethodsを参考にバイオインフォマティクス環境を整備する」ハードルは高いのが現状です。
　本セミナーでは、まず、転写産物の発現定量や品質管理、群間比較の統計的な意味についてご説明します。また、主成分分析による層別化解析を行い、特定のクラスターにおける群間解析を実施することで、サブグループ毎の遺伝子発現プロファイルを見る際の注意点を解説します。
　次に、データ解析をするための、サーバ選定やソフトウェアのインストール、実行からプロトコルの記録まで、ご説明いたします。
データ解析の統計的な意味を復習したい、外注先から発現定量値を受け取った後の目途を立てたいといったお悩みを解消します。

【こんな方におすすめ】
・オープンソースを用いたデータ解析を行いたい方
・公開データを使って遺伝子発現データ解析を始めたい方
・発現解析の基本を復習したい方
・発現解析の統計的な意味を理解したい方
・遺伝子発現プロファイリングを行い次の実験の仮説検証をすすめたい方

勉強会終了後には無料相談会を実施いたします。
無料相談のご要望が多いため、初めてご相談される方のみの、完全予約制とさせていただいております。
お申込みの際にご希望をご記入ください。

開催要項

　
テーマ Jupyterで始めるRNA-seq解析の自動化
講師アメリエフ株式会社　代表取締役CEO　山口昌雄
日程2023年4月20日（木）16:30-17:00
場所オンライン（Zoom）
定員300名
定員を超えた場合、お申し込みを受け付けられない場合がございます。予めご了承ください。
参加費無料
申込締切2023年4月19日（水）12:00
主催アメリエフ株式会社

お申込みフォーム

※お申込みを締め切りました。
　またの機会にご参加をお待ちしております。

※同業他社さまにはご参加をご遠慮頂いております。
　申し訳ございませんが、ご理解のほど宜しくお願い致します。
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